Coloração de Gram: o que é, para que serve (e passo a passo)

O que é:

A coloração de Gram é uma técnica que permite diferenciar as bactérias em Gram positivas ou Gram negativas, sendo útil para adequar o tratamento de alguns tipos de infecção.

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Esta técnica é normalmente feita como rotina no laboratório e faz parte do exame de bacterioscopia. Além da coloração das bactérias, a coloração de Gram também permite observar a forma da bactéria e as características da sua parede celular.

No resultado da coloração de Gram, as bactérias Gram positivas são identificadas com a cor azul, enquanto as Gram negativas apresentam uma coloração rosada ou arroxeada.

Para que serve

A coloração de Gram serve para classificar as bactérias em:

• Bactérias Gram-positivas: são visualizadas com a coloração azul devido ao fato de não serem descoradas pelo álcool, uma vez que possuem parede celular mais espessa e os seus poros contraem-se quando expostos ao lugol;
• Bactérias Gram-negativas: são visualizadas com a coloração rosa/roxo devido ao fato de serem descoradas pelo álcool e coradas pela safranina ou fucsina.

O resultado desta técnica permite que o médico indique um tratamento inicial para a infecção que está acontecendo, já que se conhecem características específicas desses grupos de bactérias. Este tratamento inicial diminui a velocidade de multiplicação das bactérias e previne o surgimento de uma infecção mais grave.

Após a coloração de Gram, é possível que sejam feitos outros testes em laboratório que permitem identificar a espécie da bactéria. Essa identificação é mais demorada, mas ajuda o médico a adequar melhor o antibiótico após o tratamento inicial.

Passo a passo da coloração de Gram

O passo a passo para da coloração de Gram é o seguinte:

1. Colocar algumas colônias da bactéria na lâmina do microscópio, podendo ser acrescentando uma gota de água para facilitar a homogeneização das colônias;
2. Deixar secar um pouco, podendo passar rapidamente a lâmina por uma chama para favorecer a secagem. No entanto é importante ter atenção à temperatura, já que se a temperatura for muito alta é possível que haja alteração na estrutura das bactérias, o que pode interferir no resultado do exame;
3. Cobrir com o corante cristal violeta e deixar agir por cerca de 1 minuto, quando a lâmina estiver seca;
4. Lavar a lâmina com água corrente e cobrir a lâmina com o lugol, que tem como objetivo fixar o corante azul, e deixar agir por 1 minuto.
5. Lavar novamente a lâmina com água corrente e aplicar álcool a 95%, deixando agir por 30 segundos. O álcool é responsável por dissolver a membrana de lipídios formadora das bactérias gram-negativas e, assim, remover o complexo formado entre o corante e o lugol, descorando essas bactérias.
6. Lavar mais uma vez a lâmina em água corrente e cobrir com o segundo corante, a fucsina ou safranina, e deixar agir por 30 segundos;
7. Lavar a lâmina com água corrente e deixar secar à temperatura ambiente.
8. Colocar uma gota de óleo de imersão e observar a lâmina no microscópio com objetiva de 100x, assim que a lâmina estiver seca. No microscópio será possível verificar a presença ou ausência de bactérias, bem como a presença de leveduras e células epiteliais.

É importante ressaltar que o protocolo da técnica de Gram pode variar de laboratório para laboratório, já que podem haver variações nos reagentes/corantes utilizados e concentrações.